注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗
产品介绍 Human IFN-γ ELISA Kit (Human Interferon-γ Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人γ干扰素 ELISA 试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 IFN-γ浓度。γ干扰素也称为Ⅱ型干扰素，是细胞因子超家族中 IFN 家族的重要成员，具有广泛的生物学功能，如抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、调控细胞增殖和分化等。人 IFN-γ基因定位于第 12 号染色体，在 DNA 水平上 IFN-γ基因与 IFN-α/β基因无同源性。成熟的人 IFN-γ分子是由 143 个氨基酸组成的分泌型糖蛋白，以同源二聚体形式存在，分子量为 40 kDa，其生物学作用有严格的种属特异性。人 IFN-γR 基因定位于第 6 号染色体。IFN-γR 为跨膜糖蛋白，胞膜外区、跨膜区和胞浆区分别有 228、21 和 223 个氨基酸残基，从胞膜外区结构特征来看，属于细胞因子受体、干扰素受体家族，最近命名为 CDw119。IFN-γ与受体结合后可活化多种 IFN-γ调节的基因。目前已知，IFN-γ刺激后至少有 20 种蛋白被表达，其中 12 种是 IFN-γ刺激后所特有的。这种表达是由于活化特异的 DNA 结合蛋白使其从胞浆移位到胞核，如干扰素刺激的基因因子 2 (interferon-stimulated gene fac-tor 2, ISGF2)和γ-干扰素激活因子(gamma-interferon activation factor, GAF 或 STAT 91) 结合到 IFN 基因启动子中两个称之为γ干扰素活化点 (gamma-interferon activation site, GAS)和干扰素刺激的反应元件(interferon-stimulated response element, ISRE)的位置上。IFN-γ主要由活化的 T 细胞和 NK 细胞产生，其生物学作用具有较严格的种属特异性，人 IFN-γ只作用于人或灵长类动物的细胞。在许多病理情况下，IFN-γ作为疾病的标志物的作用已得到证实。病毒感染时，IFN-γ产生。IFN-γ可作为鉴别结核性与非结核性腹水的诊断工具。IFN-γ在结核性腹水中的浓度显著高于非结核性腹水，灵敏度和特异性均达到 100％。IFN-γ对多发性硬化症的免疫治疗的设计及检测有重要意义。在移植物排斥反应临床症状出现前，IFN-γ的表达量增加；I 型糖尿病的初期，IFN-γ的产生显著下降。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人IFN-γ 浓度。在人 IFN-γ单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的 IFN-γ会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗人 IFN-γ抗体，抗人 IFN-γ抗体与结合在单抗上的人 IFN-γ结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有 IFN-γ，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在 450 nm 下测 OD 值，人 IFN-γ 浓度与 OD 450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中人 IFN-γ浓度。
UE-H6125S/H6125M/H6125L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
