注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
产品介绍 Human MCP-1 ELISA Kit (Human Monocyte Chemoattractant Protein-1 Enzyme -Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人单核细胞趋化蛋白 1 ELISA 试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 MCP-1 浓度。单核细胞趋化蛋白 1 又称单核细胞趋化和激活因子 (MCAF)，属于 C-C 亚族（β亚族）成员，是一种对单核细胞具有特异性趋化及激活活性的细胞因子，是吸引单核细胞浸润到肿瘤及组织中的有效介质。人 MCP-1 是由 76 个氨基酸残基构成的碱性蛋白质，基因定位于第 17 对染色体。人 MCP-1 前体蛋白有 99 个氨基酸残基，切除 23 个氨基酸的信号肽后形成 76 氨基酸残基的成熟 MCP-1 分子。非糖基化的 MCP-1 分子量为 8.7 kDa，经不同糖基化后 MCP-1 分子量有 13 kDa 和 15 kDa 两种。MCP-1 分子中 11 与 36 Cys 和 12 与 52Cys 之间所形成两个链内二硫键以及 Try 28 和 Arg 30，这两个二硫键对于 MCP-1 的生物学活性是必需的。在氨基酸水平上，MCP-1 与另外两种单核细胞趋化蛋白 MCP-2 (HC 14)和 MCP-3 (NC 28)分别有 62%和 72%的同源性，与 C-X-C 亚族中 IL-8 有 24％同源性。MCP-1 可由多种细胞产生, 如内膜细胞、单核/巨噬细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞、内皮细胞及某些肿瘤细胞等，而这些细胞合成分泌 MCP-1，受 IL-1、TNF 等多种细胞因子的调控。MCP-1 还能诱导单核细胞表面粘附分子的表达及细胞因子 IL-1 和 IL-6 的表达，可调节单核细胞的多种功能。体内和体外实验均证实了 MCP-1 对单核细胞具有趋化活性，可激活单核细胞和巨噬细胞，使其胞浆内 Ca2+浓度升高，产生和释放超氧阴离子，并释放溶菌酶，上调单核细胞和巨噬细胞粘附分子如 integrin 家族β 2 组和α 4 分子的表达和细胞因子 IL-1、IL-6 的产生，活化的巨噬细胞可抑制肿瘤细胞的生长。MCP 是嗜碱性粒细胞的趋化剂和激活剂，尤其是刺激嗜碱性粒细胞脱颗粒和组胺释放的作用较为强烈。MCP-1 与 MCP-1 R 发生特异性的结合，此受体主要分布于单核细胞、髓样前体细胞系和嗜碱性粒细胞，属于 IL-8 R 家族。风湿性关节炎病人的滑液和血清中MCP-1水平明显升高。胃癌，食管鳞状细胞癌，恶性胶质瘤和卵巢癌，胰腺癌，膀胱癌及乳癌几种癌症中MCP-1水平上调。肾脏炎症时，IL-1诱导肾小球细胞产生MCP-1。高胆固醇血症时，动脉内侧平滑肌细胞产生高水平MCP-1，单核细胞粘附于血管壁并浸润动脉壁。高血脂症时，LDL与肾小球细胞结合，刺激其产生 MCP-1，趋化单核细胞在局部浸润。肾脏炎症时，IL-1诱导肾小球细胞产生MCP-1。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人 MCP-1浓度。在人MCP-1单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的MCP-1会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗人MCP-1抗体，抗人MCP-1 抗体与结合在单抗上的人MCP-1结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有MCP-1，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在450 nm下测OD值，人MCP-1 浓度与OD 450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中人MCP-1浓度。
UE-H6134S/H6134M/H6134L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
