注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
产品介绍 Human MMP-9 ELISA Kit (Human Matrix Metalloproteinase 9 Enzyme -Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人基质金属蛋白酶 9 ELISA 试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 MMP-9 浓度。MMP-9是基质金属蛋白酶 (MMPs)家族中的一员，为Ⅳ 型胶原酶。MMP-9是一种金属离子依赖的蛋白酶，降解细胞外基质蛋白。它受金属蛋白酶组织抑制剂和α2-巨球蛋白抑制。基质金属蛋白酶的活性调节在组织重塑，炎症，肿瘤生长和转移等都起重要作用。人类MMP-9的（也称为明胶酶B）是一个92 kDa的酶原。MMP-9的有三个纤维连接蛋白II型区域，一个血红蛋白素样区域和一个富含脯氨酸的V型胶原蛋白同源域。MMP-9前体可被MMP-3或某些细菌蛋白水解酶激活。MMP-9前体和激活的MMP-9都受金属蛋白酶组织抑制剂和α2-巨球蛋白抑制。MMP-9前体可由单核细胞，巨噬细胞，中性粒细胞，表皮细胞，成纤维细胞，破骨细胞，软骨细胞，骨骼肌卫星细胞，内皮细胞和各种肿瘤细胞分泌。MMP-9前体由TGF-β1和 IL-1β，TGF-α，PDGF-AB，TNF-α和IL-1α表达。MMP-9的酶作用物基质包括变性胶原I型（明胶），自然胶原IV，V，VII，X和XI型，纤维蛋白素原，玻璃粘连蛋白IL-1β和内功素，层粘连蛋白和Ⅳ型胶原的复合体。MMP-9可有效降解基底膜的主要成分Ⅳ型胶原及明胶，它的异常表达与许多恶性肿瘤的转移密切相关。MMP-9 的主要功能是降解细胞外基质，参与体内多种生理及病理过程如胚胎发育、创伤修复、血管形成、炎症、肿瘤的侵润及转移等。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人 MMP-9浓度。在人MMP-9单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的MMP-9会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗人MMP-9抗体，抗人 MMP-9抗体与结合在单抗上的人MMP-9结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有MMP-9，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在450 nm下测OD 值，人MMP-9浓度与OD 450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中人MMP-9浓度。
UE-H6135S/H6135M/H6135L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
