注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
产品介绍 Human VEGF ELISA Kit (Human Vascular Endothelial Cell Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人血管内皮生长因子 ELISA 试剂盒，可以定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 VEGF 浓度。人 VEGF 是由两个相同亚基以二硫键交联组成的二聚体糖蛋白，基因定位于第 6 号染色体长臂，由 8 个外显子和 7 个内含子交替构成，约 14 kb。由于 mRNA 剪接方式不同，产生了单链分别含 121，145，165，183，189 和 206 个氨基酸的不同变异体。VEGF 121 分子量约为 34-46 kDa，是可溶性分泌型蛋白质，以游离状态存在，不能与肝素结合；VEGF 165 分子量为 45 kDa，30-50%以可溶性形式分泌于细胞外基质，其余部分与细胞膜、基底膜或细胞外基质含有肝素的糖蛋白结合。VEGF 145 存在于胎盘细胞和女性生殖道肿瘤细胞。VEGF 189 及 VEGF 206 分泌后完全结合于细胞膜或基底膜含有肝素的糖蛋白上。骨骼肌，心肌，肝细胞，成骨细胞，中性粒细胞，巨噬细胞，角质形成细胞，血小板，褐色脂肪组织，CD34 +细胞，星形细胞，神经元和内皮细胞等多种细胞和组织均可产生 VEGF。血清和血浆样本均可检测到VEGF，由于血小板可释放VEGF，因此血清中VEGF含量较高。VEGF是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，可增加血管通透性、促进血管形成、引起细胞外基质成分改变等。目前，VEGF 和 VEGFR 因其在肿瘤血管生成中的重要作用而成为抗肿瘤血管生成疗法的重要靶点。目前应用单克隆抗体、小分子抑制物、反义寡核苷酸，可溶性受体等方法通过阻断其信号转导通路或耗竭肿瘤细胞产生的 VEGF，下调 VEGF 或 VEGFR 的表达，从而抑制肿瘤血管生成，切断肿瘤血供，最终达到抑制肿瘤生长及转移的作用。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样品中人VEGF 浓度。在人VEGF单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的VEGF会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗人VEGF抗体，抗人VEGF抗体与结合在单抗上的人VEGF结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有VEGF，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在450 nm下测OD值，人VEGF浓度与OD 450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中人VEGF浓度。
UE-H6139S/H6139M/H6139L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
