注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
产品介绍 Mouse IL-1β ELISA Kit (Mouse Interleukin-17A Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即小鼠白细胞介素 1β ELISA 试剂盒，可以定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 IL-1β 浓度。 IL-1 分为 IL-1α、IL-1β两种，人和小鼠 IL-1 基因定位于 2 号染色体，均含 7 个外显子。IL-1 前体(ProIL-1)为 31 kDa，通过蛋白水解酶裂解形成成熟的 IL-1 分子。IL-1 在不同种属中有较高同源性。在氨基酸水平上，IL-1α和 IL-1β在不同种属同源性分别为 60％-70％和 75％-78％；但在同一种属中 IL-1α与 IL-1β同源性只有 25％。IL-1α和 IL-1β分子量约 17.5 kDa，等电点分别为 5 和 7，同源性为 28％。IL-1 主要是通过与其受体 (IL-1R) 结合形成 IL-1 受体复合物发挥生物学作用。T 细胞、成纤维细胞表面 IL-1R 为 80 kDa，而 B 细胞则为 68 kDa，分别称为 IL-1 RI (CDw 121 a)和 IL-1 RⅡ(CDw 121 b)。IL-1 受体复合物至少由 IL-1α或 IL-1β，Ⅰ型 IL-1 受体(IL-1RⅠ)，IL-1R 辅助蛋白(IL-1 RAcP)三部分组成。这一复合物介导了 IL-1 的信号转导。IL-1α和 IL-1β是 IL-1 受体激动性配基。IL-1 RAcP 是分子量约为 66 kDa 的多肽。细胞表面单独存在的 IL-1RⅠ与配体结合后仍然是不活跃的，只有 IL-1 RAcP 结合上去后，才能从不活跃状态转变成有激活功能的 IL-1 受体复合物。IL-1 与 IL-1 RtⅡ结合后易发生降解，因此被认为是下调受体。在某些白血病患者血清和尿中以及单核细胞培养上清中发现一种多肽性质的 IL-1 特异性抑制因子，称为 IL-1 受体拮抗物(interleukin 1 receptor antagonist, IL-1ra)， IL-1ra 能特异性地抑制 T 细胞表面 IL-1R 与 IL-1 结合。IL-1ra 不与 IL-1 直接结合，而是一种 IL-1 与 IL-1R 相互结合的竞争性抑制物。IL-1ra 与 IL-1RI 结合的亲和力要高于与 IL-1RⅡ结合的亲和力。IL-1ra、IL-1α、IL-1β与 IL-1RI 结合的亲和力比较相近，但 IL-1ra、IL-1α与 IL-1 RⅡ结合的亲和力要低于 IL-1β 与 IL-1RⅡ结合的亲和力。IL-1β主要由血液中的单核细胞和巨噬细胞产生，星形细胞，少突神经胶质细胞，肾上腺皮质细胞，NK 细胞，内皮细胞，角质形成细胞，巨核细胞，血小板，神经元，中性粒细胞，成骨细胞，许旺细胞，滋养层细胞，T 细胞和成纤维细胞也可产生 IL-1β 。IL-1 具有广泛的免疫调节作用，并有致热和介导炎症的作用。 本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法检测样品中小鼠 IL-1β 浓度。在小鼠 IL-1β 单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的 IL-1β 会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗小鼠 IL-1β 抗体，抗小鼠 IL-1β 抗体与结合在单抗上的小鼠 IL-1β 结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有 IL-1β ，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在 450 nm 下测 OD 值，小鼠 IL-1β 浓度与 OD 450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠 IL-1β 浓度。
UE-M6145S/M6145M/M6145L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
