注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。
产品介绍 Mouse IL-8(KC) ELISA Kit (Mouse Interleukin-8 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即小鼠白细胞介素 8 ELISA 试剂盒，可以定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 IL-8(KC)浓度。小鼠 KC(keratinocyte-derived Cytokine)角化细胞源性细胞因子也称为 CXCL1 或 N51，最初是从成纤维细胞中作为 PDGF 诱导的即早基因(Immediate early gene)被鉴定出，其编码一个约 8 kDa 的分泌蛋白。根据小鼠 KC 的蛋白质序列，其属于 alpha（CXC）趋化因子家族。除有丝分裂原活化的成纤维细胞外，KC 还能在细菌或 LPS 刺激的腹膜及肺巨噬细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞上诱导表达。研究表明糖皮质激素可抑制有丝分裂原对 KC 的诱导表达。小鼠 KC 的 cDNA 编码 96 个氨基酸残基的前体蛋白，N 末端 19 个氨基酸残基经剪切产生 77 个氨基酸残基的成熟 KC 蛋白。小鼠 KC 的蛋白序列与另一个 alpha 趋化因子 MIP-2 具有 63%的序列同一性。与其他 alpha 趋化因子类似，小鼠 KC 是中性粒细胞的强诱导剂和激活剂。小鼠 KC 和 MIP-2 的生物学活性是通过独特的小鼠 IL-8 受体来介导的。小鼠 IL-8R 与人 IL-8Rß和 IL-8Rα分别具有 71%和 68%的序列同一性。由于在小鼠中还没有鉴定到 IL-8 同源物，所以 MIP-2 和 KC 被认为在功能上与 IL-8 相似，在小鼠中作为主要的促炎症反应 alpha-趋化因子。本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法检测样品中小鼠 IL-8(KC)浓度。在小鼠 IL-8(KC)单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的 IL-8(KC)会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗小鼠 IL-8(KC)抗体，抗小鼠 IL-8(KC)抗体与结合在单抗上的小鼠 IL-8(KC)结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有 IL-8(KC)，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在 450 nm 下测 OD 值，小鼠 IL-8(KC)浓度与 OD 450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠 IL-8(KC)浓度。
UE-M6150S/M6150M/M6150L◆没有信号？1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色？1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差？1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。
