注:终止液和显色剂具有腐蚀性,一旦接触到液体,请尽快用大量清水冲洗。
产品介绍 Swine IL-6 ELISA Kit (Swine Interleukin-6 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ,即猪白细胞介素 6 ELISA 试剂盒,可以定量检测猪血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 IL-6 浓度。 白细胞介素 6 是一种多效性的、具有α-螺旋结构、磷酸化和易变地糖基化位点的细胞因子,分子量为 22-28 kDa,在调节急性期反应、炎症反应、造血功能、骨代谢和癌症研究中发挥至关重要的作用。猪的 IL-6 成熟肽由 183 个氨基酸组成,与人、小鼠、大鼠 IL - 6 分别具有 58%、39%和 39% 的同源性。多种细胞均可表达 IL-6,包括细胞毒性 T 细胞、成纤维细胞、滑膜细胞、脂肪细胞、成骨细胞、巨核细胞、内皮细胞。IL-6 对免疫应答、急性期反应、造血和神经系统有多方面作用。IL-6 的生物学活性主要包括调节免疫应答、调节造血系统、诱导急性期蛋白、调节肿瘤生长、调节神经内分泌系统和其它等 6 个方面。IL-6 与临床上多种疾病的发生均有关系。与自身免疫性疾病,肿瘤均有密切的关系。IL-1和 TNF-α对 IL-6 引起的病理损伤可能有协同作用。应用 IL-6 治疗放疗、化疗所致血小板减少症,癌症以及作为疫苗佐剂已进入临床试验。 本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法检测样品中猪 IL-6 浓度。在猪 IL-6 单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品,其中的 IL-6 会与其单抗结合,洗去游离成分;加入生物素化的抗猪 IL-6 抗体,抗猪 IL-6 抗体与结合在单抗上的猪 IL-6 结合而形成免疫复合物,洗去游离的成分;加入辣根过氧化物酶标记的亲合素,生物素与亲合素特异性结合,洗去未结合的酶结合物;加入显色剂,若反应孔中有 IL-6,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色;加终止液变为黄色。在 450 nm 下测 OD 值,猪 IL-6 浓度与 OD 450 值之间呈正比,可通过绘制标准曲线计算出样品中猪 IL-6 浓度。◆没有信号?1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验;检查试剂配制方法;复核试验试剂添加流程。2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量;增加抗体用量(浓度)。4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板,而非组织培养板;使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。◆整块板呈现规则蓝色?1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。◆标准曲线差?1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板,而非组织培养板;使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。